Может ли семья брата оспорить в суде моё завещание не в их пользу,если брат и родители давно умерли, а с невесткой,племянником и племяннице отношений не поддерживаю?

Здравствуйте, в данном случае для оспаривания вашего завещания должны быть основания, например недееспособность завещателя, введение в заблуждение итд, однако это все крайне сложно, ведь завещание оформляется через нотариуса. Право Обязательной доли здесь тоже у них не возникает, поэтому ничего они сделать не смогут.

ГК РФ Статья 1149. Право на обязательную долю в наследстве
 

1. Несовершеннолетние или нетрудоспособные дети наследодателя, его нетрудоспособные супруг и родители, а также нетрудоспособные иждивенцы наследодателя, подлежащие призванию к наследованию на основании пунктов 1 и 2 статьи 1148 настоящего Кодекса, наследуют независимо от содержания завещания не менее половины доли, которая причиталась бы каждому из них при наследовании по закону (обязательная доля), если иное не предусмотрено настоящей статьей.
(в ред. Федерального закона от 29.07.2017 N 259-ФЗ)

(см. текст в предыдущей редакции)